SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为什么浓缩胶会被压缩成层?如何调节凝胶的孔径?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2023/02/07 22:39:07

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为什么浓缩胶会被压缩成层?如何调节凝胶的孔径?

我想楼主是不是想问浓缩胶的浓缩原理?
不连续系统的凝胶包括浓缩胶和分离胶.浓缩胶的孔径大,分离胶的孔径小.在电场的作用下,蛋白质颗粒在大孔胶中泳动时遇到的阻力小,移动快.而在小孔胶中泳动时遇到的阻力大,移动慢.因此,在两层凝胶的交界处,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带.同时,由于在两层凝胶中均有Tris和HCl.Tris的作用是维持溶液的电中性及pH.HCl在一定pH条件下易解离出Cl- ,它在电场中迁移率大,走在最前面,故称为快离子或前导离子.电极缓冲液中的甘氨酸在pH8.3的缓冲液中解离度很小,仅为0.1-1%,因而在电场中迁移率很小,称为慢离子或尾随离子.大多数蛋白质在pH8.3或6.7时均带负电荷,在电场中均移向正极,其有效迁移率介于快慢离子之间,于是蛋白质就在快慢离子间形成的界面处,被浓缩成极窄的区带.就达到了压缩效果.
如果想调节凝胶的孔径,只要改变凝胶的浓度就可以了,一般情况下,浓缩胶中丙烯酰胺-甲叉丙烯酰胺的浓度在3%-5%,我的经验是,垂直槽跑蛋白,小于3%的,浓缩胶就非常脆弱了,大于5%的,胶就相对脆硬了,最适合的浓度需要经过自己的实验进行尝试.

因为配制胶板的时候你是一层一层的倒进去的,等一层干了你再倒入上一层,每一层上表面就会在重力作用下成水平(前提你得把装置放在一个水平的台面上)。最后胶就是成层状分布了。从上到下一共分两层,浓缩胶和分离胶。
调节胶中聚丙烯酰胺的浓度可以调节凝胶的孔径,至于具体的多大浓度用于多大分子量你可以自己在网上找到。...

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因为配制胶板的时候你是一层一层的倒进去的,等一层干了你再倒入上一层,每一层上表面就会在重力作用下成水平(前提你得把装置放在一个水平的台面上)。最后胶就是成层状分布了。从上到下一共分两层,浓缩胶和分离胶。
调节胶中聚丙烯酰胺的浓度可以调节凝胶的孔径,至于具体的多大浓度用于多大分子量你可以自己在网上找到。

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